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搖床振幅如何正確選擇?
1、什么是搖床的振幅?
搖床的振幅指托盤在做圓周運(yùn)動時候的直徑,有時候我們也叫“振蕩直徑”或“軌道直徑”符號:。上海智城提供了0-50MM(無級調(diào)速),國內(nèi)首創(chuàng),專利產(chǎn)品,并參與起草了符合國家的恒溫振蕩器行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)口某品牌提供振幅為3mm,25mm和50mm的搖床,其他國產(chǎn)的提供了26mm,30mm,50mm固定的三個段振幅選擇。
2、什么是氧氣傳遞效率(OTR)?
氧氣傳遞效率是指,氧氣從大氣中傳入到液體中的效率。OTR數(shù)值越高,氧傳遞效率越高。
3、振幅和轉(zhuǎn)速的影響
這兩個因素都會影響培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的混合。 混合效果越好,氧傳遞速率(OTR)就越好。遵循這些指導(dǎo)原則,可以選擇最適合的振幅和轉(zhuǎn)速。
一般來說,選擇25mm振幅可以作為萬能振幅應(yīng)用于所有培養(yǎng)。
正因為如此,大多搖床的振幅都是25毫米。在一些應(yīng)用中,如果對氧傳遞/細(xì)胞生長有特殊的限制,可能會選擇一些特殊的振幅。
4、細(xì)菌,酵母和真菌培養(yǎng):
搖瓶中的氧氣傳遞效率比生物反應(yīng)器低得多。多數(shù)情況下氧傳遞可能是搖瓶培養(yǎng)的限制因素。振幅與錐形培養(yǎng)瓶的大小相關(guān):大瓶使用大振幅。
建議:25mm振幅應(yīng)用于從25毫升到2升的錐形培養(yǎng)瓶,50mm振幅應(yīng)用于2升至5升的錐形培養(yǎng)瓶。
5、細(xì)胞培養(yǎng):
* 然而,哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)對氧氣的需求相對較低,較低的功率輸入即可。
* 對于250mL搖瓶,在較為寬廣的振幅和振速范圍(20-60mm振幅;100-300rpm)都可以提供足夠的氧氣傳遞。
* 如果直徑較大的燒瓶(Fernbach燒瓶)推薦使用50毫米振幅
* 使用一次性培養(yǎng)袋,推薦使用50mm振幅。
6、微孔板和深孔板:
對微孔板和深孔板有兩種不同的方法可以獲得最大的氧氣轉(zhuǎn)移!
* 50mm振幅,轉(zhuǎn)速不低于250rpm
* 使用3mm振幅,轉(zhuǎn)速在800-1000rpm
7、請注意以下幾點(diǎn)
在許多情況下即使選擇了合理的振幅,也未必能增加生物培養(yǎng)量,因為培養(yǎng)量的增加會受到多個因素影響。舉例:如果十個因素中有一兩個不理想,那么無論其他因素有多好,培養(yǎng)量的增長都是有限的,或者可以這樣說,如果培養(yǎng)量的受限因素只有氧傳遞時,振幅的正確選擇會得到明顯的培養(yǎng)箱增加。比如,碳源若是受限因素,無論氧傳遞效果多好,也不會達(dá)到理想的培養(yǎng)量。
振幅和轉(zhuǎn)速
振幅和轉(zhuǎn)速都會對氧傳遞造成影響。如果在轉(zhuǎn)速很低(比如100rpm)的細(xì)胞培養(yǎng)中,振幅的不同對氧傳遞幾乎沒有明顯影響。要達(dá)到最高的氧傳遞效果,首先是盡可能的提高轉(zhuǎn)速,托盤會適當(dāng)?shù)钠胶廪D(zhuǎn)速。并不是所有的培養(yǎng)物都能夠在高速震蕩下良好生長,一些對剪切力敏感的培養(yǎng)物,高轉(zhuǎn)速會導(dǎo)致培養(yǎng)物死亡。
其他影響因素
* 裝液量,錐形燒瓶的裝液量為不超過總體積的三分之一。如果要達(dá)到最大氧傳遞,裝液量不能超過10%。永遠(yuǎn)不要將裝液量達(dá)到50%。
* 擾流板:在所有類型的培養(yǎng)中,擾流板都有效提高氧傳遞。有些廠家推薦使用“超高產(chǎn)量”培養(yǎng)瓶。這種瓶的擾流板會增大液體摩擦力,搖床可能會達(dá)不到最大設(shè)定轉(zhuǎn)速。
振幅和轉(zhuǎn)速的關(guān)聯(lián)關(guān)系
搖瓶中的離心力可以通過下面公式計算
FC=rpm2 ×振幅,離心力和振幅間存在線性關(guān)系:如果使用25mm振幅 到 50mm振幅(轉(zhuǎn)速相同),離心力增加了2倍。
離心力和轉(zhuǎn)速存在平方關(guān)系:
如果轉(zhuǎn)速提高到2倍(振幅相同),離心力提高4倍。如果轉(zhuǎn)速提高到3倍,離心力則提高9倍!如果用振幅25mm,在給定的速度下,進(jìn)行培養(yǎng)。如果希望用振幅50mm,達(dá)到相同的離心力,轉(zhuǎn)速應(yīng)該用1/2的平方根計算,因此您應(yīng)該使用70%的轉(zhuǎn)速,達(dá)到形同的培養(yǎng)條件。